精品久久,日韩黄色电影免费三区,婷停五月深爱五月,亚洲免费精典AV

網(wǎng)站首頁  ◇  技術(shù)支持  ◇  蛋白質(zhì)純化的選擇方法
蛋白質(zhì)純化的選擇方法
  • 發(fā)布日期:2017-12-22     信息來源:      瀏覽次數(shù):3867
    • 蛋白質(zhì)純化的選擇方法

      隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,越來越多的科研人員熟練掌握了分子生物學(xué)的各種試驗(yàn)技術(shù),并研制成套試劑盒,使基因克隆表達(dá)變得越來越容易。但分子生物學(xué)的上游工作往往并非是zui終目的,分子克隆與表達(dá)的關(guān)鍵是要拿到純的表達(dá)產(chǎn)物,以研究其生物學(xué)作用,或者大量生產(chǎn)出可用于疾病治療的生物制品。相對與上游工作來說,分子克隆的下游工作顯得更難,蛋白純化工作非常復(fù)雜,除了要保證純度外,蛋白產(chǎn)品還必須保持其生物學(xué)活性。純化工藝必須能夠每次都能產(chǎn)生相同數(shù)量和質(zhì)量的蛋白,重復(fù)性良好。這就要求應(yīng)用適應(yīng)性非常強(qiáng)的方法而不是用能得到純蛋白的方法去純化蛋白。在實(shí)驗(yàn)室條件下的好方法卻可能在大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用中失敗,因?yàn)楹笳咭笠?guī)?;?,且在每日的應(yīng)用中要有很好的重復(fù)性。本文綜述了蛋白質(zhì)純化的基本原則和各種蛋白純化技術(shù)的原理、優(yōu)點(diǎn)及局限性,以期對蛋白純化的方法選擇及整體方案的制定提供一定的指導(dǎo)。

      蛋白純化的一般原則

      蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA、RNA等分開,由于此時(shí)樣本體積大、成分雜,要求所用的樹脂高容量、高流速,顆粒大、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開,防止目的蛋白被降解。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率,此階段是要把目的蛋白與那些大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,要用更小的樹脂顆粒以提高分辨純化的*步,它可以初步粗提蛋白質(zhì),去除非蛋白成分。蛋白質(zhì)在硫酸銨沉淀中較穩(wěn)定,可以短期在這種狀態(tài)下保存中間產(chǎn)物,當(dāng)前蛋白質(zhì)純化多采用這種辦法進(jìn)行粗分離翻。在規(guī)?;a(chǎn)上硫酸銨沉淀方法仍存在一些問題,硫酸銨對不銹鋼器具的腐蝕性很強(qiáng)。其他的鹽如硫酸鈉不存在這種問題,但其純化效果不如硫酸銨。除了鹽析外蛋白還可以用多聚物如PEG和防凍劑沉淀出來,PEG是一種惰性物質(zhì),同硫酸銨一樣對蛋白有穩(wěn)定效果,在緩慢攪拌下逐漸提高冷的蛋白溶液中的PEG濃度,蛋白沉淀可通過離心或過濾獲得,蛋白可在這種狀態(tài)下長期保存而不損壞。 蛋白沉淀對蛋白純化來說并不是多么好的方法,因?yàn)樗荒苓_(dá)到幾倍的純化效果,而我們在達(dá)到目的前需要上千倍的純化。其好處是可以把蛋白從混雜有蛋白酶和其他有害雜質(zhì)的培養(yǎng)基及細(xì)胞裂解物中解脫出來。

    舔b国产麻豆| 通化市| 天天视频一区二区三区免费| 亚洲福利www| 丝袜人妻舔鸡| 久久中文字幕综合网|精品人妻一| 色宗合狠狠操| 九九久久九九久久九九久久| 曰本少妇ww内射| 中日韩偷拍一区二区三区视频 | 精品人妻少妇水多奶白粉嫩凹凸网| 午夜yellow| 日韩精品久久中文无码| 99久久久精品伊人大线蕉| 最新不卡无码| 天天舔久久熟女| 久久噜噜噜精品| 欧美日韩在线成人视频| 草热视频在线| 欧美mv一区二区潮喷| 午夜精品福利极品99| 免费看b 国产| 黄色精品午夜片| 久久色婷婷综合网| 国产一区二区三区四区五区蜜| 超碰aⅴ人人做人人爽欧美| 欧美久久久久A国产欧美一区二区| 午夜伦理电影免费观看视频| 天天日天天操天天透| 中文字幕在线观看三区五区| AV短片传媒| 国产乱爱一二三四区| 欧美黄日本| 午夜性生活影视| 国产精品天干高清在线| 99久久精品国产一区二区,| 日常成人综合在线| 成人少妇熟女视频一区二区三区| 成人女黄色观看视频| 91com免费操| 日韩欧美在线视频草第9夜|